Rapid antigen detection test for respiratory syncytial virus diagnosis as a diagnostic tool / Teste rápido de detecção de antígenos para o diagnóstico do Vírus Sincicial Respiratório como ferramenta de diagnóstico

Abstract Objective: The aim of this study was to evaluate the QuickVue® RSV Test Kit (QUIDEL Corp, CA, USA) as a screening tool for respiratory syncytial virus in children with acute respiratory disease in comparison with the indirect immunofluorescence assay as gold standard. In Brazil, rapid antigen detection tests for respiratory syncytial virus are not routinely utilized as a diagnostic tool, except for the diagnosis of dengue and influenza. Methods: The authors retrospectively analyzed 486 nasopharyngeal aspirate samples from children under age 5 with acute respiratory infection, between December 2013 and August 2014, the samples were analyzed by indirect immunofluorescence assay and QuickVue® RSV Test kit. Samples with discordant results were analyzed by real time PCR and nucleotide sequencing. Results: From 313 positive samples by immunofluorescence assays, 282 (90%) were also positive by the rapid antigen detection test, two were positive only by rapid antigen detection test, 33 were positive only by immunofluorescence assays, and 171 were positive by both methods. The 35 samples with discordant results were analyzed by real time PCR; the two samples positive only by rapid antigen detection test and the five positive only by immunofluorescence assays were also positive by real time PCR. There was no relation between the negativity by QuickVue® RSV Test and viral load or specific strain. The QuickVue® RSV Test showed sensitivity of 90%, specificity of 98.8%, predictive positive value of 99.3%, and negative predictive value of 94.6%, with accuracy of 93.2% and agreement κ index of 0.85 in comparison to immunofluorescence assay. Conclusions: This study demonstrated that the QuickVue® RSV Test Kit can be effective in early detection of Respiratory syncytial virus in nasopharyngeal aspirate and is reliable for use as a diagnostic tool in pediatrics.

Resumo Objetivo: Avaliar o teste QuickVue® RSV Test Kit (QUIDEL Corp, CA, EUA) para o diagnóstico rápido do vírus sincicial respiratório em crianças com doença respiratória aguda, comparandoo com a imunofluorescência indireta como padrão ouro. Visto que, no Brasil, testes rápidos para detecção de antígenos para vírus sincicial respiratório não são rotineiramente utilizados como ferramenta de diagnóstico, exceto para Dengue e Influenza. Métodos: Um total de 486 amostras de aspirado de nasofaringe de crianças menores de 5 anos com doença respiratória aguda, coletadas entre dezembro de 2013 e agosto de 2014, foram analisadas por imunofluorescência e pelo teste QuickVue®. Amostras com resultados discordantes entre os métodos foram submetidas a PCR em tempo real e sequenciamento. Resultados: Das 313 amostras positivas por IFI, 282 foram positivas no teste rápido (90%), 2 amostras foram positivas apenas no teste rápido (0.6%), 33 apenas na imunofluorescência (10.5%) e 171 foram negativas em ambos os métodos. As 35 amostras com resultados discordantes foram testadas por PCR em tempo real, sendo que duas que foram positivas apenas no teste rápido e 5 apenas na imunofluorescência confirmaram-se positivas. Não houve relação entre a ausência de positividade no teste QuickVue® com a carga ou com a cepa viral. O teste QuickVue® mostrou sensibilidade de 90.1%, especificidade 98.9%, valor preditivo positivo 99.3%, valor preditivo negativo de 94.6%, acurácia de 93.2% e índice de concordância de 0.85 em comparação à imunofluorescência. Conclusões: Nosso estudo demonstrou que o teste QuickVue® RSV pode ser efetivo na detecção precoce do vírus sincicial respiratório em amostras de aspirado de nasofaringe e é confiável como uma ferramenta de diagnósticos em pediatria.

Effects of ethyl pyruvate on leukocyte-endothelial interactions in the mesenteric microcirculation during early sepsis treatment

OBJECTIVES: Experimental studies on sepsis have demonstrated that ethyl pyruvate is endowed with antioxidant and anti-inflammatory properties. This study aimed to investigate the effects of ethyl pyruvate on leukocyte-endothelial interactions in the mesenteric microcirculation in a live Escherichia coli-induced sepsis model in rats. METHODS: Male Wistar rats were administered an intravenous suspension of E. coli bacteria or were subjected to a sham procedure. Three hours after bacterial infusion, the rats were randomized into the following groups: a control group without treatment, a group treated with lactated Ringer’s solution (4 mL/kg, i.v.), and a group treated with lactated Ringer’s solution (4 mL/kg, i.v.) plus ethyl pyruvate (50 mg/kg). At 24 h after bacterial infusion, leukocyte-endothelial interactions were investigated using intravital microscopy, and the expression of P-selectin and intercellular adhesion molecule-1 was evaluated via immunohistochemistry. White blood cell and platelet counts were also determined at baseline and 3 h and 24 h after E. coli inoculation. RESULTS: The non-treated and lactated Ringer’s solution-treated groups exhibited increases in the numbers of rolling leukocytes (∼2.5-fold increase), adherent cells (∼3.0-fold), and migrated cells (∼3.5-fold) compared with the sham group. In contrast, treatment with Ringer’s ethyl pyruvate solution reduced the numbers of rolling, adherent and migrated leukocytes to the levels observed in the sham group. Additionally, the expression of P-selectin and intercellular adhesion molecule-1 was significantly increased on mesenteric microvessels in the non-treated group compared with the sham group (p<0.001). The expression of both adhesion molecules was reduced in the other groups, with ethyl pyruvate being more effective than lactated Ringer’s solution. Infusion of bacteria caused significant leukopenia (3 h), followed ...

Infecção urinária comunitária: etiologia segundo idade e sexo / Community-acquired urinary tract infection: age and gender-dependent etiology

INTRODUÇÃO: A escolha do antimicrobiano para tratamento inicial de infecção de trato urinário (ITU) costuma ser empírica e deve considerar a prevalência dos uropatógenos nas diversas faixas etárias e sexo. OBJETIVO: Avaliar a prevalência de uropatógenos em ITU comunitária e sua relação com idade e sexo. MÉTODOS: Estudo transversal conduzido em pronto socorro (PS) de hospital geral, de janeiro a dezembro, 2010, em pacientes menores de 15 anos com suspeita clínica de ITU, que colheram urocultura quantitativa. Definida ITU como urocultura com crescimento de agente único > 100.000 unidades formadoras de colônia (ufc)/mL na coleta por jato médio ou > 50.000 ufc/mL na coleta por sondagem vesical. RESULTADOS: Ocorreram 63.464 atendimentos no PS. Foram obtidas 2.577 uroculturas; destas, 291 foram positivas para ITU (prevalência = 11,3% das suspeitas clínicas e 0,46% dos atendimentos); 212 casos (72,8%) em meninas, mediana de idade = 2,6 anos. O uropatógeno predominante foi E.coli (76,6%), seguido por Proteus mirabilis (10,3%) e Staphylococcus saprophyticus (4,1%). Em lactentes < 3 meses, a prevalência de E.coli foi significativamente menor (50% x 78,4%; OR = 0,276; p = 0,006). Maior prevalência de Staphylococcus saprophyticus ocorreu em pacientes > 10 anos (24,4% x 0,4%; OR = 79,265; p < 0,0001). Proteus mirabilis foi significativamente mais prevalente em meninos (24,0% x 5,2%; OR = 5,786; p < 0,001). CONCLUSÕES: E. coli foi o uropatógeno mais prevalente das ITU comunitárias. Entretanto, na escolha do antimicrobiano empírico inicial, deve-se levar em consideração a prevalência significativa de outros agentes diferentes de E. coli em lactentes < 3 meses, a alta prevalência de Staphylococcus saprophyticus em pacientes > 10 anos e de Proteus mirabilis em meninos.

INTRODUCTION: Choosing the antimicrobial agent for initial therapy of urinary tract infection (UTI) is usually empirical and should consider the prevalence of uropathogens in different age groups and gender. OBJECTIVE: To establish prevalence rates of uropathogens in community-acquired UTI in relation to age and gender. METHODS: Crosssectional study conducted in the emergency department (ED) of a general hospital, from January to December, 2010, in patients younger than 15 years old who had clinical suspicion of UTI and collected quantitative urine culture. UTI was defined as urine culture with growth of a single agent > 100.000 colony forming units (cfu)/mL in a midstream collection or > 50.000 cfu/mL in urethral catheterization. RESULTS: There were 63.464 visits to ED. 2577 urine cultures were obtained, of whom 291 were positive for UTI (prevalence = 11.3% of clinical suspicion and 0.46% of visits), 212 cases (72.8%) in females, median age = 2.6 years. The predominant uropathogen was E. coli (76.6%), followed by Proteus mirabilis (10.3%) and Staphylococcus saprophyticus (4.1%). Among infants < 3 months, prevalence rates of E. coli were significantly lower (50% vs 78.4%; OR = 0.276; p = 0.006). Higher prevalences of Staphylococcus saprophyticus occurred among patients > 10 years (24.4% vs 0.4%; OR = 79.265; p < 0.0001). Proteus mirabilis was significantly more prevalent in boys than girls (24.0% vs 5.2%; OR = 5.786; p < 0.001). CONCLUSIONS: E. coli was the most prevalent community-acquired uropathogen. Nevertheless, initial empiric antimicrobial treatment of UTI should consider the significant prevalence of other agents different from E. coli in infants < 3 months, the high prevalence of Staphylococcus saprophyticus in patients > 10 years and Proteus mirabilis in males.

Impacto do uso da prova rápida para estreptococo beta-hemolítico do grupo A no diagnóstico e tratamento da faringotonsilite aguda em pronto-socorro de Pediatria / Impact of the rapid antigen detection test in diagnosis and treatment of acute pharyngotonsillitis in a Pediatric emergency room / Impacto del uso de la prueba rápida para estreptococos beta-hemolíticos del grupo A en el diagnóstico y tratamiento de la faringotonsilitis en emergencia de Pediatría

OBJETIVO: Avaliar o impacto da realização rotineira da prova rápida para pesquisa de estreptococo do grupo A no diagnóstico e tratamento da faringotonsilite aguda em crianças. MÉTODOS: Estudo prospectivo e observacional que contou com a utilização de protocolo de pesquisa estabelecido na Unidade de Emergência do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo para o atendimento de crianças e adolescentes com faringotonsilite aguda. RESULTADOS: Com base na avaliação clínica, dos 650 pacientes estudados, antimicrobianos seriam prescritos para 389 indivíduos (59,8%) e, com o uso da pesquisa de estreptococo do grupo A, foram prescritos em 286 pacientes (44,0%). Das 261 crianças que não receberiam antibiótico pelo quadro clínico, 111 (42,5%) tiveram pesquisa de estreptococo do grupo A positiva. O diagnóstico baseado no quadro clínico apresentou sensibilidade de 61,1%, especificidade de 47,7%, valor preditivo positivo de 44,9% e valor preditivo negativo de 57,5%. CONCLUSÕES: O diagnóstico clínico da faringotonsilite estreptocócica mostrou baixa sensibilidade e especificidade. O uso rotineiro da prova rápida para pesquisa de estreptococo permitiu a redução do uso de antibióticos e a identificação de um grupo de risco para as complicações da infecção estreptocócica, pois 42,5% dos pacientes com prova rápida positiva não receberiam antibióticos, se levado em consideração apenas o diagnóstico clínico.

OBJECTIVE: To evaluate the impact of the routine use of rapid antigen detection test in the diagnosis and treatment of acute pharyngotonsillitis in children. METHODS: This is a prospective and observational study, with a protocol compliance design established at the Emergency Unit of the University Hospital of Universidade de São Paulo for the care of children and adolescents diagnosed with acute pharyngitis. RESULTS: 650 children and adolescents were enrolled. Based on clinical findings, antibiotics would be prescribed for 389 patients (59.8%); using the rapid antigen detection test, they were prescribed for 286 patients (44.0%). Among the 261 children who would not have received antibiotics based on the clinical evaluation, 111 (42.5%) had positive rapid antigen detection test. The diagnosis based only on clinical evaluation showed 61.1% sensitivity, 47.7% specificity, 44.9% positive predictive value, and 57.5% negative predictive value. CONCLUSIONS: The clinical diagnosis of streptococcal pharyngotonsillitis had low sensitivity and specificity. The routine use of rapid antigen detection test led to the reduction of antibiotic use and the identification of a risk group for complications of streptococcal infection, since 42.5% positive rapid antigen detection test patients would not have received antibiotics based only on clinical diagnosis.

OBJETIVO: Evaluar el impacto de la realización de rutina de la prueba rápida para investigación de estreptococos del grupo A en el diagnóstico y tratamiento de la faringotonsilitis aguda en niños. MÉTODOS: Estudio prospectivo y observacional que contó con el uso de protocolo de investigación establecido en la Unidad de Emergencia del Hospital Universitario de la USP para la atención a niños y adolescentes con faringotonsilitis aguda. RESULTADOS: Con base en la evaluación crítica, de los 650 pacientes estudiados, antimicrobianos serían prescritos a 389 individuos (59,8%) y, con el uso de la investigación de estreptococos del grupo A se los prescribieron a 286 pacientes (44,0%). De los 261 niños que no recibirían antibióticos por el cuadro clínico, 111 (42,5%) tuvieron investigación de estreptococos del grupo A positiva. El diagnóstico basado en el cuadro clínico presentó sensibilidad del 61,1%, especificidad del 47,7%, valor predictivo positivo del 44,9% y valor predictivo negativo del 57,5%, CONCLUSIONES: En este estudio, el diagnóstico clínico de la faringotonsilitis estreptocócica mostró baja sensibilidad y especificidad. El uso de rutina de la prueba rápida para investigación de estreptococos permitió la reducción del uso de antibióticos y la identificación de un grupo de riesgo para las complicaciones de la infección estreptocócica, pues el 42,5% de los pacientes con prueba rápida positiva no recibirían antibióticos si se llevara en consideración solamente el diagnóstico clínico.

Recognition of enteroinvasive Escherichia coli and Shigella flexneri by dendritic cells: distinct dendritic cell activation states

The innate and adaptive immune responses of dendritic cells (DCs) to enteroinvasive Escherichia coli (EIEC) infection were compared with DC responses to Shigella flexneri infection. EIEC triggered DCs to produce interleukin (IL)-10, IL-12 and tumour necrosis factor (TNF)-α, whereas S. flexneri induced only the production of TNF-α. Unlike S. flexneri, EIEC strongly increased the expression of toll like receptor (TLR)-4 and TLR-5 in DCs and diminished the expression of co-stimulatory molecules that may cooperate to inhibit CD4+ T-lymphocyte proliferation. The inflammation elicited by EIEC seems to be related to innate immunity both because of the aforementioned results and because only EIEC were able to stimulate DC transmigration across polarised Caco-2 cell monolayers, a mechanism likely to be associated with the secretion of CC chemokine ligands (CCL)20 and TNF-α. Understanding intestinal DC biology is critical to unravelling the infection strategies of EIEC and may aid in the design of treatments for infectious diseases.

Infecção urinária em menores de 15 anos: etiologia e perfil de sensibilidade antimicrobiana em hospital geral de pediatria / Urinary tract infection in children under 15 years: etiology and antimicrobial susceptibility in a children's hospital

OBJETIVO: Descrever a prevalência dos principais agentes etiológicos de infecção urinária comunitária em crianças menores de 15 anos e analisar o perfil de sensibilidade antimicrobiana do principal agente, Escherichia coli. MÉTODOS: Estudo retrospectivo conduzido a partir de uroculturas com crescimento de agente único, com unidades formadoras de colônia maior ou igual a 10(5)/mL. A população selecionada foi atendida no Pronto Atendimento de Pediatria do Hospital Universitário da Universidade de São Paulo entre janeiro de 2006 e dezembro de 2007. Para analisar o perfil de sensibilidade de E. coli, foram excluídos casos com infecção urinária de repetição e/ou portadores de uropatias. RESULTADOS: Dos 176 casos de infecção urinária, 133 (76 por cento) ocorreram no sexo feminino e 43 (24 por cento) no masculino. A faixa etária de maior prevalência das infecções urinárias foi a de menores de dois anos, com 84 casos (48 por cento). Escherichia coli foi o principal agente isolado (122 culturas - 69 por cento do total). Foram encontrados altos índices de sensibilidade antimicrobiana de E. coli às cefalosporinas de segunda e terceira geração (cefuroxima e ceftriaxona, 100 por cento), aos aminoglicosídeos (amicacina, 100 por cento; gentamicina, 96,4 por cento), ao ácido nalidíxico (97,3 por cento), à nitrofurantoina (98,2 por cento) e às quinolonas (ciprofloxacina e norfloxacina, 98,2 por cento); sensibilidade moderada à cefalosporina de primeira geração (cefalotina, 78,4 por cento); baixa sensibilidade à ampicilina (38,7 por cento) e ao sufametoxazol-trimetoprim (55 por cento). CONCLUSÕES: E. coli continua sendo a bactéria mais prevalente das infecções urinárias comunitárias. Conhecendo a baixa sensibilidade in vitro dessa bactéria à sulfametoxazol-trimetoprim e à ampicilina, recomenda-se que tais drogas não sejam eleitas para a terapêutica inicial.

OBJECTIVE: To describe the prevalence of the most frequent etiological agents of community acquired urinary tract infection in children under the age of 15 years, as well as to analyse the antimicrobial susceptibility patterns of the most prevalent pathogen, Escherichia coli. METHODS: Retrospective study conducted from urine cultures of a single bacterial species, at a concentration > 10(5) colonies forming units/mL. The children included in the study were treated in the Pediatric Emergency Care Unit of the University Hospital of the University of Sao Paulo from January, 2006 to December, 2007. In order to analyze Escherichia coli antimicrobial susceptibility patterns, cases with recurrent urinary tract infection and/or carriers of uropathy were excluded. RESULTS: Among 176 urinary tract infection patients, 133 (76 percent) were females. Children less than two years old presented the highest prevalence of urinary tract infection (84 cases; 48 percent). E. coli was the main agent (122 cultures - 69 percent of the total). There were high rates of E. coli antimicrobial susceptibility to second and third-generation cephalosporins (cefuroxime and ceftriaxone, 100 percent), aminoglycosides (amikacin, 100 percent, gentamicin, 96.4 percent), nalidixic acid (97.3 percent), nitrofurantoin (98.2 percent) and quinolones (ciprofloxacin and norfloxacin, 98.2 percent); moderate susceptibility to first-generation cephalosporin (cephalothin, 78.4 percent); low susceptibility to ampicillin (38.7 percent) and sufamethoxazole-trimethoprim (55 percent). CONCLUSIONS: E. coli remains the most prevalent bacterial pathogen of community acquired urinary tract infection. Given the low in vitro susceptibility of these bacteria to sulfamethoxazole-trimethoprim and ampicillin, these drugs should not be elected as the initial choice for treatment.

Faringoamidalite estreptocócica: comparação entre diagnóstico clínico e microbiológico / Streptococcal pharyngitis: comparison between the clinical and microbiological diagnosis

Introdução: Faringoamidalite é queixa frequente nos pronto-socorros pediátricos, com presença do Streptococcus pyogenes em 20 por cento dos casos. Os sinais e sintomas clínicos são insuficientes para diferenciar quadros virais dos bacterianos. Os métodos microbiológicos, teste rápido(TR) e cultura orofaringe(CO) são indispensáveis para diagnóstico e redução de antibióticos...

Introductions: Pharyngitis is a common complaint in the emergency room for children, with the presence of Streptococcus pyogenes in 20 per cent of the cases. The clinical signs and symptoms are insufficient to differentiate viral from bacterial infections. The microbiological methods, rapid test (RT) and oropharynx cultura (OC), are essential for diagnosis and for reducing the use of antibiotics...

Mesenteric microcirculatory dysfunctions and translocation of indigenous bacteria in a rat model of strangulated small bowel obstruction

PRUPOSE: Bacterial translocation has been shown to occur in critically ill patients after extensive trauma, shock, sepsis, or thermal injury. The present study investigates mesenteric microcirculatory dysfunctions, the bacterial translocation phenomenon, and hemodynamic/metabolic disturbances in a rat model of intestinal obstruction and ischemia. METHODS: Anesthetized (pentobarbital 50 mg/kg, i.p.) male Wistar rats (250-350 g) were submitted to intestinal obstruction or laparotomy without intestinal obstruction (Sham) and were evaluated 24 hours later. Bacterial translocation was assessed by bacterial culture of the mesenteric lymph nodes (MLN), liver, spleen, and blood. Leukocyte-endothelial interactions in the mesenteric microcirculation were assessed by intravital microscopy, and P-selectin and intercellular adhesion molecule (ICAM)-1 expressions were quantified by immunohistochemistry. Hematocrit, blood gases, lactate, glucose, white blood cells, serum urea, creatinine, bilirubin, and hepatic enzymes were measured. RESULTS: About 86 percent of intestinal obstruction rats presented positive cultures for E. coli in samples of the mesenteric lymph nodes, liver, and spleen, and 57 percent had positive hemocultures. In comparison to the Sham rats, intestinal obstruction induced neutrophilia and increased the number of rolling (~2-fold), adherent (~5-fold), and migrated leukocytes (~11-fold); this increase was accompanied by an increased expression of P-selectin (~2-fold) and intercellular adhesion molecule-1 (~2-fold) in the mesenteric microcirculation. Intestinal obstruction rats exhibited decreased PaCO2, alkalosis, hyperlactatemia, and hyperglycemia, and increased blood potassium, hepatic enzyme activity, serum urea, creatinine, and bilirubin. A high mortality rate was observed after intestinal obstruction (83 percent at 72 h vs. 0 percent in Sham rats). CONCLUSION: Intestinal obstruction and ischemia in rats is a relevant model for ...

Detection of diarrheagenic Escherichia coli from children with and without diarrhea in Salvador, Bahia, Brazil

We identified different diarrheagenic (DEC) Escherichia coli pathotypes isolated from 1,207 children with and without acute endemic diarrhea in Salvador, Bahia, Brazil collected as part of a case-control study. Since the identification of DEC cannot be based on only biochemical and culture criteria, we used a multiplex polymerase chain reaction developed by combining five specific primer pairs for Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC), Shiga toxin-producing E. coli/ Enterohaemorrhagic E. coli (STEC/EHEC), Enterotoxigenic E. coli (ETEC) and Enteroaggregative E. coli (EAEC) to detect these pathotypes simultaneously in a single-step reaction. In order to distinguish typical and atypical EPEC strains, these were tested for the presence of EAF plasmid. The prevalence of diarrheagenic E. coli in this sample of a global case-control study was 25.4 percent (259 patients) and 18.7 percent (35 patients) in the diarrhea group (1,020 patients) and the control group (187 patients), respectively. The most frequently isolated pathotype was EAEC (10.7 percent), followed by atypical EPEC (9.4 percent), ETEC (3.7 percent), and STEC (0.6 percent). Typical EPEC was detected only in one sample. The prevalence of the pathotypes studied in children with diarrhea was not significantly different from that in children without diarrhea.

Serological and molecular diversity of human rotavirus in São Paulo, Brazil

From a total of 187 fecal samples from children with ages between 0 and 5 years, collected in the Hospital Universitário -USP, Brazil, from 1994 to 1996, 54 (28.9 percent) were positive for rotavirus. Positive samples were characterized by electropherotyping, subgrouping, G serotype and genotype and P genotype. Rotavirus electropherotypes were characterized in four different long genome patterns (38.9 percent), one short genome pattern (34.0 percent) and 18.0 percent were characterized as an unusual pattern. Subgroup I was found in 38.9 percent strains, subgroup II in 50.0 percent and 7.7 percent was subgroup nonI-nonII. For G serotypes, G2 was found in 59.3 percent, G1 was identified in 33.3 percent of strains, two samples showed mixtures of G1+G2 and one sample was G1+G3. Ten samples characterized as serotype G2 showed a long eletropherotype. Genotype G2 was the most frequently and was found in 37 (44.0 percent) samples (23 samples as a single genotype and 14 as mixtures of genotypes). G1 was found in 15 samples. G3 and G4 was detected mainly in mixtures of genotypes and G5, G6 and G9 were identified only in mixtures. A total of 20 (38.5 percent) samples were characterized as G genotype mixtures and P mixtures were found in 16 (29.6 percent) samples. P[4] was found in 55.6 percent of samples, P[8] in 51.9 percent and P[6-M37 like] in 22.3 percent of cases. P[6-Gottfried like] and P[11] were detected only in mixtures. One sample with G6 specificity, mixed with a G2 rotavirus and a P[11] strain, mixed with P[4] and P[8]strain was described for the first time in Latin America.

De um total de 187 amostras fecais de crianças com idades entre 0 e 5 anos, coletadas no Hospital Universitário -USP, Brasil, de 1994 a 1996, 54 (28.9 por cento) foram positivas para rotavírus. As amostras positivas foram caracterizadas quanto ao eletroferótipo, subgrupo, sorotipo G e genotipo G e P. Foram identificados quatro diferentes eletroferótipo longos em 38.9 por cento das amostras, um eletroferótipo curto (34,0 por cento) e 18,0 por cento foram caracterizadas como um eletroferótipo não usual. O subgrupo I foi encontrado em 38,9 por cento amostras, o subgrupo II em 50,0 por cento e nãoI-nãoII em 7,7 por cento. O sorotipo G2 foi encontrado em 59,3 por cento e G1 em 33,3 por cento. Duas amostras apresentaram misturas de G1+G2 e outra amostra G1+G3. Dez amostras caracterizadas como sorotipo G2 mostraram perfil eletroferótico longo. O genotipo G2 foi o mais freqüente, encontrado em 37 amostras (23 como único genotipo e 14 associados a outro genotipo). G1 foi encontrado em 15 amostras; G3 e G4 foram detectados principalmente em misturas e G5, G6 e G9, identificados somente em misturas. Um total de 20 (38,5 por cento) amostras foram identificadas como misturas de genotipo G e foram encontradas 16 (29,6 por cento) amostras com misturas de genotipo P. P[4] foi encontrado em 55,6 por cento das amostras, P[8] em 51,9 por cento e P[6-M37 like], em 5,5 por cento das amostras. P[6-Gottfried like] e P[11] foram detectados somente em misturas. Uma amostra com especificidade G6, associada ao genotipo G2 e outra P[11] misturada com P[4] e de P[8] foram identificadas pela primeira vez na América Latina.

Genetic relatedness among clinical strains of Stenotrophomonas maltophilia in tertiary care hospital settings in São Paulo State, Brazil

Stenotrophomonas maltophilia is a Gram-negative bacillus, which is becoming widely recognized as an important nosocomial pathogen. The main objective of this study was to evaluate the genetic relatedness, by random amplified polymorphic DNA (RAPD) and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of 86 clinical isolates of S. maltophilia (colonization 22, infection 64) obtained from 79 hospitalized patients, from different geographic regions of São Paulo State. The genotypic analysis performed by RAPD and PFGE was used in 24 isolates for genetic identity confirmation. The results were congruent between the two methods but it was not possible to link genetic profiles with the studied variables, clinical state and geographic area, probably due to the great variability among the strains. The analyses by PFGE confirmed identity in 5 pairs of microorganisms and RAPD, in this study, showed to be a useful tool for investigation of diversity leading the identification of 85 genetic profiles. The genetic diversity shown may be due to re-infection by different strains or co-infection by multiple strains which suggests multiple entry sources of the bacterium in the hospital setting or of acquisition by patient. In this setting, colonization, infection and re-infection occur with unknown frequency, raising the need for the establishment of specific control measures.

Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, conhecido como importante patógeno nosocomial. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a relação genética, através da análise randômica do polimorfismo de DNA (RAPD) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), de 86 isolados clínicos de S. maltophilia (22 de colonização, 64 de infecção) obtidos de 79 pacientes hospitalizados em diferentes regiões geográficas do estado de São Paulo. A análise genotípica foi realizada através da técnica RAPD e o PFGE foi usado em 24 isolados para confirmar a identidade genética dos mesmos. Os resultados foram coerentes entre os dois métodos, mas não foi possível correlacionar um perfil genético com as variáveis estudadas, estado clínico e área geográfica, provavelmente pela ampla variabilidade entre as linhagens. A análise por PFGE confirmou a identidade genética em 5 pares de microrganismos e o RAPD, neste estudo, mostrou ser uma ferramenta útil para investigação da diversidade, possibilitando identificar 85 perfis genéticos. A diversidade genética observada através do RAPD pode ser devido à re-infecção por diferentes linhagens ou co-infecção por linhagens distintas, sugerindo múltiplas fontes de entrada da bactéria no hospital ou de aquisição pelo paciente. Nesse ambiente, a colonização, infecção e re-infecção ocorrem com freqüência, o que leva à necessidade do estabelecimento de medidas de controle específicas.

Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates

O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p< 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.

Capture immunoassay for LT detection produced by enterotoxigenic Escherichia coli in bacterial isolates

A capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which detects LT-I toxin produced by enterotoxigenic Escherichia coli strains, has beendeveloped. This capture assay was performed using the IgG enriched fraction of anti-LT-I antiserum and IgG2b anti-LT-I monoclonal antibody and allowed a clear distinction between E. coli LT-I - producing and non-producing strains. The estimated accuracy of the assay is 78% for sensitivity, 94% for specificity and 92% for efficiency. Thus, the capture immunoassayis a sensitive tool for detection of E. coli, which produces heat-labile enterotoxin, and is suitable for use in clinical laboratories and epidemiological surveys in developing world.

O objetivo do presente trabalho foi a padronização de um imunoensaio de captura para detecção de amostras de E. coli produtoras da toxina LT-I. Este ensaio de captura foi desenvolvido utilizando-se a fração enriquecida em IgG do anticorpo policlonal anti-LT e um anticorpo monoclonal caracterizado como IgG2b. Através deste método verificou-se uma clara distinção entre cepas de E. coli produtoras e não produtoras da toxina (p 0,0001), sendo a sensibilidade do método de 78%, a especificidade de 94% e a eficiência de 92%. Assim, o imunoensaio de captura mostrou-se como uma ferramenta sensível para a detecção de amostras de E. coli que produzem a enterotoxina termo-lábil, podendo ser aplicado em laboratórios clínicos e inquéritos epidemiológicos em paises em desenvolvimento.

Proteases (caseinase and elastase), hemolysins, adhesion and susceptibility to antimicrobials of Stenotrophomonas maltophilia isolates obtained from clinical specimens

Forty-six S. maltophilia isolates obtained from hospital clinical specimens were studied for protease (caseinase and elastase) production, hemolytic activity, adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. Susceptibility to antimicrobial agents was also evaluated. The majority of isolates were obtained from respiratory tract secretions of patients using medical devices. All the isolates grown overnight were able to hydrolyze casein at 30ºC and 37ºC. After 72h, all the isolates hydrolyzed elastase at 30ºC and 40 isolates (87 per cent) at 37ºC. Most of the isolates presented hemolytic activity after 96h of incubation at both temperatures. Rabbit blood showed the hightest hemolytic activity, after 96h 61(per cent) and 98(per cent) of tested isolates presented b-hemolysis at 30ºC and 37ºC, respectively. All isolates were susceptible to trimethoprim-sulfametoxazole and were resistant to most b-lactams tested. By the dilution method, S. maltophilia showed a high susceptibility to ticarcillin-clavulanate and a lower susceptibility to ciprofloxacin than the agar diffusion. The isolates showed adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. The proteolytic activities and adhesion to inanimate surfaces detected in S. maltophilia can be related to the pathogenesis of this bacterium and/or medical device colonization which favors the development of nosocomial infections.

Uptake of iron from different compounds by enteroinvasive Escherichia coli

This work aimed the study of acquisition of iron from different compounds by EIEC strains. Seven serotypes were studied (028ac.H-, 029:H, 0136:H-, 0144:H-, 0152:H-, 0164:H- and 0167:H7-), in a total 0f 31 strains. All serotypes were able to use distinct iron sources: hemin, hematin, hemoglobin, ovotransferin, lactoferrin, transferrin and ferritin.

Leucócitos fecais na diarréia aguda por Campylobacter sp termofílico / Fecal leucocytes in Campylobacter associated acute diarrhea

Com o intuito de se comparar as porcentagens de positividade para leucócitos fecais obtidas em esfregaços de fezes corados pelo método de Gram, de acordo com o agente enteropatogênico identificado, foram estudadas, em Säo Paulo - SP, 184 amostras de fezes provenientes de crianças com diarréia aguda. Dessas amostras, 29 eram positivas para Campylobacter sp termofílico, 12 para agentes invasivos e 103 para agentes näo invasivos, sendo que nas 40 amostras restantes nenhum agente enteropatogênico. Leucócitos fecais foram encontrados nos casos de campilobacteriose em proporçöes estatisticamente semelhante às encontradas em casos de diarréias causadas por patógenos intestinais invasivos e significativamente maiores do que em infecçöes por agentes näo invasivos ou naquelas onde nenhum agente enteropatogênico foi identificado